杭州浩克生物一、實(shí)驗(yàn)器材及試劑
1、實(shí)驗(yàn)器材
| 名稱 | 廠家 | 型號(hào) |
| 脫水機(jī) | 武漢俊杰電子有限公司 | JJ-12J |
| 包埋機(jī) | 武漢俊杰電子有限公司 | JB-P5 |
| 病理切片機(jī) | 上海徠卡儀器有限公司 | RM2016 |
| 凍臺(tái) | 武漢俊杰電子有限公司 | JB-L5 |
| 組織攤片機(jī) | 浙江省金華市科迪儀器設(shè)備有限公司 | KD-P |
| 烤箱 | 上海?，攲?shí)驗(yàn)儀器有限公司 | DGX-9003B |
| 載玻片及蓋玻片 | 江蘇世泰實(shí)驗(yàn)器材有限公司 | 10212432C |
| 微波爐 | 格蘭仕微波爐電器有限公司 | P70D20TL-P4 |
| 脫色搖床 | 北京市六一儀器廠 | WD-9405A |
| 渦旋混合器 | 天悅電子 | TYXH-II |
| 移液槍 | Dragon | KE0003087/KA0056573 |
| 組化筆 | Gene tech | GT1001 |
| 倒置熒光顯微鏡 | 日本尼康 | Nikon Eclipse Ti-SR |
| 成像系統(tǒng) | 日本尼康 | Nikon DS-U3 |
2、主要實(shí)驗(yàn)試劑
| 試劑 | 廠家 | 貨號(hào) |
| 無(wú)水乙醇、二甲苯 | 國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司 | |
| EDTA（PH8.0)抗原修復(fù)液 | 谷歌生物 | |
| EDTA(PH9.0)抗原修復(fù)液 | 谷歌生物 | G1203 |
| 檸檬酸（PH6.0)抗原修復(fù)液 | 谷歌生物 | G1202 |
| PBS緩沖液 | 谷歌生物 | G0002 |
| BSA | solarbio | A8020 |
| 熒光二抗（FITC、CY3） | 谷歌生物 | |
| DAPI | 谷歌生物 | G1012 |
| 抗熒光淬滅封片劑 | 谷歌生物 | G1401 |
二、石蠟切片免疫熒光實(shí)驗(yàn)步驟
1、石蠟切片脫蠟至水：依次將切片放入二甲苯Ⅰ15min-二甲苯Ⅱ15min-無(wú)水乙醇Ⅰ5min-無(wú)水乙醇Ⅱ5min-85%酒精5min-75%酒精5min-蒸餾水洗。
2、抗原修復(fù)：組織切片置于盛滿EDTA抗原修復(fù)緩沖液(PH9.0)的修復(fù)盒中于微波爐內(nèi)進(jìn)行抗原修復(fù)。中火至沸后斷電間隔10min中低火至沸，此過(guò)程中應(yīng)防止緩沖液過(guò)度蒸發(fā)，切勿干片。自然冷卻后將玻片置于PBS(PH7.4)中在脫色搖床上晃動(dòng)洗滌3次，每次5min。(修復(fù)液和修復(fù)條件根據(jù)組織來(lái)確定)
3、加一抗：輕輕甩掉封閉液，在切片上滴加PBS按一定比例配好的一抗，切片平放于濕盒內(nèi)4°C孵育過(guò)夜。(濕盒內(nèi)加少量水防止抗體蒸發(fā))
4、加二抗：玻片置于PBS(PH7.4)中在脫色搖床上晃動(dòng)洗滌3次，每次5min。切片稍甩干后在圈內(nèi)滴加與一抗相應(yīng)種屬的二抗覆蓋組織，避光室溫孵育50min。
5、DAPI復(fù)染細(xì)胞核：玻片置于PBS(PH7.4)中在脫色搖床上晃動(dòng)洗滌3次，每次5min。切片稍甩干后在圈內(nèi)滴加DAPI染液，避光室溫孵育10min。
6、封片：玻片置于PBS(PH7.4)中在脫色搖床上晃動(dòng)洗滌3次，每次5min。切片稍甩干后用抗熒光淬滅封片劑封片。
7、鏡檢拍照：切片于尼康倒置熒光顯微鏡下觀察并采集圖像。
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