杭州浩克生物
標(biāo)本要求：組織、細(xì)胞、
實(shí)驗(yàn)周期：1-2周
收費(fèi)價(jià)格：每個(gè)樣品每個(gè)基因250元，每個(gè)基因2對(duì)引物費(fèi)2*70元
產(chǎn)品介紹：亞硫酸氫鹽處理后測(cè)序(bisulfite sequencing PCR,BSP)法是檢測(cè)基因甲基化的經(jīng)典方法,其原理為:用亞硫酸氫鈉修飾處理基因組DNA,所有未發(fā)生甲基化的胞密啶(c)被轉(zhuǎn)化為尿密啶(U)而甲基化的胞嘧啶則不變。據(jù)此設(shè)計(jì)針對(duì)甲基化和非甲基化序列的引物進(jìn)行PCR。通過(guò)電泳檢測(cè)MSP擴(kuò)增產(chǎn)物,如果用針對(duì)處理后甲基化DNA鏈的引物能得到擴(kuò)增片段,則說(shuō)明該位點(diǎn)存在甲基化反之,說(shuō)明被檢測(cè)的位點(diǎn)不存在甲基化。若兩隊(duì)引物均能得到陽(yáng)性PCR產(chǎn)物,則說(shuō)明該片段部分甲基化。
實(shí)驗(yàn)流程：
(1) 樣本接收:組織、細(xì)胞、血液、其它
(2) 實(shí)驗(yàn)步驟: DNA提取-亞硫酸氫鹽處理-純化DNA-PCR擴(kuò)增-電泳
(3)實(shí)驗(yàn)結(jié)果:完整項(xiàng)目報(bào)告(材料、試劑、儀器、方法、數(shù)據(jù)分析、實(shí)驗(yàn)結(jié)果)
注意事項(xiàng):
1、組織樣品:新鮮組織放入液氮或-80度保存,組織不少于100mg,
2、培養(yǎng)細(xì)胞:通過(guò)細(xì)胞計(jì)數(shù)取不少于2×106個(gè)細(xì)胞于EP管,收集細(xì)胞沉淀后,液氮速凍,低溫保存或運(yùn)輸(-80℃,避免反復(fù)凍融);
3、血液標(biāo)本:以抗凝管保存血樣(-4℃保存3~5天,如果要長(zhǎng)時(shí)間保存需放在-80℃);
4、DNA樣品需標(biāo)明濃度和純度(體積≥50u,濃度≥ 50 ng/ul);
5、樣本運(yùn)輸:可選擇以下任何一種方式高送標(biāo)本
a組織樣本、細(xì)胞樣本以干冰運(yùn)輸;
b.細(xì)胞樣本也可直接寄送培養(yǎng)瓶(密封保證不污染、培養(yǎng)液不漏出);
6、提供詳細(xì)的基因信息, MSP方法的擴(kuò)增序列在140bp左右。我們會(huì)根據(jù)客戶的基因序列信息設(shè)計(jì)引物,并在方案實(shí)驗(yàn)過(guò)程中隨時(shí)與客戶溝通。
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