【產(chǎn)品簡(jiǎn)介】

酪酰胺信號(hào)放大（TSA）系統(tǒng)可用于檢測(cè)熒光免疫細(xì)胞化學(xué)（ICC）、免疫組織化學(xué)（IHC）   中的低豐度靶點(diǎn)，可將信號(hào)靈敏度提高100倍。TSA 熒光試劑盒使用辣根過(guò)氧化物酶（HRP）直接催化固定化酶周?chē)臒晒饣鶊F(tuán)共價(jià)沉積，形成永久性共價(jià)鍵結(jié)合。在運(yùn)用HRP二抗及一抗在室溫下由抗體洗脫液脫離掉抗原失活的原理，重復(fù)此過(guò)程，即可實(shí)現(xiàn)同種屬熒光雙標(biāo)及熒光三標(biāo)以及多標(biāo)（注：此過(guò)程僅適用于冰凍切片、細(xì)胞爬片的熒光多標(biāo)）。

此試劑盒中的熒光探針可單獨(dú)或配合使用。可以實(shí)現(xiàn)單標(biāo)、雙標(biāo)、三標(biāo)、四標(biāo)或熒光放大等功能不受一抗種屬的影響，極大豐富了熒光多色的內(nèi)容。

【儲(chǔ)存與運(yùn)輸】

冰袋（wet ice）運(yùn)輸；-20℃長(zhǎng)期保存,短期于4℃保存，有效期 12 個(gè)月。

【使用方法】

細(xì)胞爬片

1.固定通透

在培養(yǎng)板中將已爬好細(xì)胞的玻片用PBS浸洗3次，每次3min，用4%多聚甲醛固定15min，PBS浸洗3此，每次3min。細(xì)胞通透劑（貨號(hào)：HKI0048）室溫通透20min（細(xì)胞膜上表達(dá)的抗原可省略）。

2.封閉處理

PBS浸洗3次，每次3min，吸水紙吸干PBS，滴入封閉液（貨號(hào)：HKW2085/86/87/99）完全覆蓋細(xì)

胞，室溫封閉30min。

3.一抗孵育

棄掉封閉液，滴加用通用抗體稀釋液（貨號(hào)：HKW2083）適當(dāng)比例稀釋的一抗并放入濕盒，4℃孵育過(guò)夜（或37℃濕盒孵育2h）。

4.二抗孵育

PBST浸洗3次，每次3敏，吸干多余液體滴加稀釋好的與一抗相應(yīng)種屬的HRP標(biāo)記二抗，濕盒中37℃孵育1h，PBST浸洗3次，每次3min。

5.加TSA 信號(hào)放大試劑

根據(jù)需要標(biāo)記的熒光顏色加對(duì)應(yīng)的TSA 信號(hào)放大試劑，孵育3-10min可具體根據(jù)預(yù)實(shí)驗(yàn)條件。如遇標(biāo)記效果差的可添加熒光增強(qiáng)劑進(jìn)一步加強(qiáng)，增強(qiáng)劑:熒光試劑1:500正常孵育，濃度也可摸索使用。

6. 熒光多色實(shí)現(xiàn)

抗體洗脫液37℃預(yù)熱至完全溶解，滴加足量抗體洗脫液完全覆蓋細(xì)胞，37℃放置8分鐘，棄去洗脫液，再次滴加足量抗體洗脫液完全覆蓋細(xì)胞，37℃放置8分鐘，棄洗脫液，PBS浸洗3次，每次5min，洗脫掉一抗及相應(yīng)二抗，再重復(fù)步驟3-5，實(shí)現(xiàn)熒光多色。

7.DAPI復(fù)染細(xì)胞核

8.抗熒光淬滅封片劑封片

9.相應(yīng)熒光通道拍照或掃描

冰凍切片

1. 復(fù)溫固定

冰凍切片室溫防置30min后，入純甲醇固定10min。（亦可采用其他固定方式）

2.阻斷內(nèi)源性過(guò)氧化物酶和血清封閉

PBS浸洗切片3次，每次5min，用過(guò)氧化物酶阻斷劑（貨號(hào)：HKI0047）孵育25min，阻斷內(nèi)源性過(guò)氧化物酶，滴入封閉液（貨號(hào)：HKW2085/86/87/99）37℃孵育20min。

3.一抗孵育

棄掉封閉液，滴加適當(dāng)比例稀釋的一抗并放入濕盒，4℃孵育過(guò)夜。

4.二抗孵育

PBST浸洗3次，每次3敏，吸干多余液體滴加稀釋好的與一抗相應(yīng)種屬的HRP標(biāo)記二抗，濕盒中37℃孵育1h，PBST浸洗3次，每次3min。

5.加TSA 信號(hào)放大試劑

根據(jù)需要標(biāo)記的熒光顏色加對(duì)應(yīng)的TSA 放大試劑，孵育3-10min可具體根據(jù)預(yù)實(shí)驗(yàn)條件。如遇標(biāo)記效果差的可添加熒光增強(qiáng)劑進(jìn)一步加強(qiáng)，增強(qiáng)劑:熒光試劑1:500正常孵育，濃度也可摸索使用。

   6.熒光多色實(shí)現(xiàn)

抗體洗脫液37℃預(yù)熱至完全溶解，滴加足量抗體洗脫液完全覆蓋組織，37℃放置8分鐘，棄去洗脫液，再次滴加足量抗體洗脫液完全覆蓋細(xì)胞，37℃放置8分鐘，棄洗脫液，PBS浸洗3次，每次5min，洗脫掉一抗及相應(yīng)二抗，再重復(fù)步驟3-5，實(shí)現(xiàn)熒光多色。

7.DAPI復(fù)染細(xì)胞核

8.抗熒光淬滅封片劑封片

9.相應(yīng)熒光通道拍照或掃描

【注意事項(xiàng)】

1.本產(chǎn)品僅作科研用途。

2.為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

3. POLY-HRP羊抗兔二抗屬于附贈(zèng)試劑，不足100T劑量，可根據(jù)需要回購(gòu)。

4.樣本來(lái)源為兔（或小鼠），若出現(xiàn)較高非特異性熒光著色，一抗為兔抗（或鼠抗）時(shí)，可采用POLY-HRP羊抗兔二抗(貨號(hào)：HKI0026）或POLY-HRP羊抗鼠二抗（貨號(hào)：HKI0027）。