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一步法TUNEL細胞凋亡檢測試劑盒(綠,AF488)

一步法TUNEL細胞凋亡檢測試劑盒(綠,AF488)

  • 價格¥1500
  • 規(guī)格50T
  • 貨號HKI0010
  • 單位
  • 品牌HaoKebio

產(chǎn)品介紹
產(chǎn)品參數(shù)
資料下載
貨號品名50T100T
HKI0010-1AF488熒光反應(yīng)液2.5ml5ml
HKI0010-2TdT酶50ul100ul

【產(chǎn)品簡介】
細胞在發(fā)生凋亡時,會激活一些 DNA 內(nèi)切酶,這些內(nèi)切酶會切斷核小體間的基因組 DNA。 細胞凋亡時抽提 DNA 進行電泳檢測,可以發(fā)現(xiàn) 180-200bp 的 DNAladder?;蚪M DNA 斷裂時, 暴露的 3′-OH 可以在末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶(TerminalDeoxynucleotidyl  Transferase,TdT) 的催化下加上綠色 AF488 標(biāo)記的dUTP,從而可以通過熒光顯微鏡或流式細胞儀進行檢測,這就 是 TUNEL(TdT-mediated  dUTPNick-End Labeling)法檢測細胞凋亡的原理

【儲存與運輸】
冰袋運輸,-20?C 儲存,可穩(wěn)定儲存一年。

【使用方法】

石蠟切片熒光tunel實驗步驟

石蠟切片脫蠟至水:依次將切片放入二甲苯 Ⅰ 15min-二甲苯Ⅱ15min-無水乙醇 Ⅰ5min-無水 乙醇Ⅱ5min,取出置于通風(fēng)廚內(nèi)等酒精晾干后放入自來水中稍洗,蒸餾水洗。(冬天應(yīng)提高脫蠟 溫度或適當(dāng)延長脫蠟時間)

通透:pH6.0 檸檬酸修復(fù)液中火修復(fù)8min ,室溫冷卻,用免疫組化筆劃圈,之后純水洗三 次(重要)。  (通透方式有多鐘:1 蛋白酶消化,2tritonx100 通透劑通透,檸檬酸修復(fù))

配試劑工作液以及孵育:熒光反應(yīng)液和 TdT 酶按 50:1 比例混合,此液為 tunel 工作液,, 將 tunel 工作液加入到圈內(nèi)覆蓋組織,切片平放于濕盒內(nèi),37℃恒溫箱孵育 1 到 2 小時,濕盒 內(nèi)加少量水保持濕度。

DAPI 復(fù)染細胞核:切片用 PBS (PH7.4) 洗滌 3 次,每次 5min。去除 PBS 后在圈內(nèi)滴加 DAPI 染液,避光室溫孵育 10min。

封片:玻片置于 PBS (PH7.4) 中在脫色搖床上晃動洗滌 3 次,每次5min。切片稍甩干后用 抗熒光淬滅封片劑封片。

鏡檢拍照:切片于尼康倒置熒光顯微鏡下觀察并采集圖像。

石蠟切片熒光tunel結(jié)果判讀

DAPI 染出來的細胞核在紫外的激發(fā)下為藍色,試劑盒為 AF488 標(biāo)記,陽性凋亡細胞核為綠 色。

【注意事項】

1. 本試劑僅供科研。

2. 操作時請穿實驗服,佩戴一次性手套。

暫無

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